凍干機(jī)如何在血液中制備抗菌肽？抗菌肽原指昆蟲體內(nèi)經(jīng)誘導(dǎo)而產(chǎn)生的一類具有抗菌活性的堿性多肽物質(zhì)，由20～60個氨基酸殘基組成。這類活性多肽多數(shù)具有強(qiáng)堿性、熱穩(wěn)定性以及廣譜抗菌等特點。在養(yǎng)殖業(yè)里，主要用于替代抗生素作保?。豢捎糜谥委熋庖呷毕菁膊?，主要作用抗菌、免疫調(diào)節(jié)、修復(fù)損傷。

    國內(nèi)外關(guān)于雞源抗菌肽的研究，主要針對雞小腸中的抗菌肽，而血中抗菌肽的提取及抗菌活性研究在國內(nèi)外卻很少有報道。目前，我國雞的飼養(yǎng)量很大，屠宰雞的下腳料雞血很多，對其進(jìn)行抗菌肽的提取和研究，是對資源的利用和再開發(fā)，是很有必要的。

   雞血中抗菌肽的提取方法，其特征在于:它包括如下具體步驟:

     一、雞血采集:從屠宰場采取新鮮雞血2-3L，使用5%檸檬酸鈉抗凝； 

    二、萃取:將新鮮雞血放置37℃溫箱靜置l_2h，取上清按照1:4的比例加入0.84%氯化銨溶液，混勻靜置3min,常溫400r/min離心10min,棄上清按比例加入氯化銨溶液混勻靜置3min，再次500r/min離心10min ;棄上清，使沉淀與少量4℃的生理鹽水短時間混合，再用200ml的4℃的10%冰醋酸使沉淀懸浮，充分混勻，倒入50ml燒杯，超聲波處理50次，然后溶液使用磁力攪拌器混勻攪動于4℃下萃取一夜；次日，將萃取的溶液取出15000r/min離心30min，取上清4℃下保存，沉淀再次混懸于冷的10%醋酸中，充分混勻，混勻攪動于4℃下萃取一夜；第三天將萃取的溶液取出15000r/min離心30min，最后將溶液4℃下保存； 

    三、除酸、濃縮:合并所保存的溶液，將溶液注入透析袋，扎緊袋口，然后將其放入燒杯，再向燒杯中倒入蒸餾水，蒸餾水液面要超過透析袋，4℃下透析除酸，每12h換水一次，直至透析袋外蒸餾水pH大于6，將透析袋放入瓷盤中，撒上聚乙二醇6000，透析濃縮約3-4h后即可將透析袋取出，將濃縮的溶液取出低溫凍干，轉(zhuǎn)移至青霉素小瓶中，密封-20℃保存； 

    四、抗菌肽的分離:將凍干樣品用0.5%甲醇溶解，再上樣于層析柱葡聚糖凝膠SephadexG25,同時打開柱的下端出口，注意控制流速為lmL/min,5mL/管,用部分收集器收集洗脫液，5mL/管，收集的溶液用紫外分光光度計測其在280nm處的吸收值，將在280nm處有吸收的溶液分裝于青霉素瓶中，再在低溫凍干機(jī)中凍干，-80℃保存，取各瓶凍干保存的樣品各20mg，分別溶于滅菌雙蒸水中，無菌條件下用微孔濾膜過濾樣品，將藥敏紙片浸泡于過濾后的樣品中，浸泡過夜后，用平皿紙片法初篩，收集具有抗菌活性的組分，置于5℃保存； 

   五、抗菌肽的純化與濃縮:使用超濾裝置進(jìn)行超濾，膜包選用截流分子量為20kD，洗脫液選用0.5%甲醇溶液，濾出液 既 為所要獲得的溶液。

上海田楓儀器有限公司www.sf241.com 凍干機(jī)  www.tfsye.com